-淀粉酶活性测定(89)
所需的材料
注:以下所引用的所有化学品均可从Sigma-Aldrich获得.
1. KPO4-NaCl buffer; 0.1 M pH 6.9在25°C含0.01 M NaCl. 溶解8.71克K2HPO4, 500毫升H2O. 滴定至pH值6.9和0.1 m kh2po4 (6.8gm/500 ml H2O). 加入NaCl到0.01 M. 谨慎! 在下面的步骤2和3中使用通风罩和搅拌器/加热板.
2. Substrate solution; 1% soluble starch. 将1克溶于80毫升水中，加热并搅拌至约. 90°C，冷却，调整体积至100毫升.
3. Color reagent; 44.0mm3,5 -二硝基水杨酸. 将1克3,5脱氧核糖核酸溶解于80毫升.5 M NaOH加热搅拌钙. 70°C. 加入30克酒石酸钠，搅拌至溶解. 冷却至室温，加入水至100毫升. 储存在琥珀瓶中. 室温稳定30天.
4. Maltose standard; 0.01 M. 将36毫克麦芽糖溶解在10毫升KPO4-NaCl缓冲液中.
5. 酶解. 将淀粉酶稀释至0.KPO4-NaCl缓冲液05 mg/ml.
6. 在适于100°C加热的管子中准备以下稀释液.
| 管 |
mlPO4-NaCl |
 淀粉酶 |
ml |
μM |
毫升的水 |
| 1测试 |
0.50 |
0.01 ml |
----- |
----- |
0.40 |
| 2性病 |
0.5 |
---------- |
0.05 |
0.5 |
0.45 |
将所有管子加热至25°C. 在0时刻加0.5毫升底物溶液注入1号管和6号管，孵育2分钟. 加1停止反应.0 ml显色剂. 在一个温度区以100°的温度加热所有管子10分钟. 冷却至室温，加入2.每管5毫升水. 让试管在室温下放置10分钟.
7. 阅读腹肌vs. 坯料在540 nm处. 画腹肌vs腹肌. μ mol麦芽糖. 测定坡度540/μM麦芽糖.
8. 计算比活度，i.e.在pH为6时，每毫克淀粉酶每分钟释放的麦芽糖为μM.9,
25°C，从斜率开始.