所需的材料
1. Tris buffer; 0.2 M pH 7.7在25°C下制备,含0.2 M NaCl.
2. Substrate solution; 2.0 mM. 68年解散.0毫克hippuryl-L-arginine在100毫升水. 加热至约50°C,如有必要,搅拌以加速溶解. 冷却至室温. 每日准备新鲜食物. 保存在冰中.
3. Enzyme solution; dissolve 0.1毫克/毫升的tris缓冲液. 保存在冰中.
过程
1. 将分光光度计调至254 nm,细胞温度调至25°C
2. 混合1.5 ml tris-buffer和1.5 ml底物溶液在细胞内. 平衡到25°C
3. 加入20 μl CPB溶液, 混合并测定吸光度增加率, 每隔30秒,坚持3分钟. 计算 ∆从初始线性反应254nm/min.
比活度计算
Î, 1%, 280 = 21.2 mg/ml=A280 x 0.472 Vol = 3.02毫升A= 254 nM T= 25°C
光路= 1.0 cm
0.349 =在pH值7时,1 mM河马酸的吸收率增加.7
单位 = ∆A/min x 3.02 ml
mg 0.349 x 0.002 mg