HSE检测采用FH237

人痰弹性蛋白酶活性测定(62) 

MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA (EPC号. FH237)作为衬底.

所需的材料

1.     Tris-NaCl buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25ºC含0.5 M NaCl. 溶解12.70 g Tris-HCl, 2.36g Tris-base和29.22 g NaCl, 900 ml H₂O. 测定pH值，必要时用0滴定.1m HCl或0.1m NaOH到pH 7.5在25ºC. 用H调至1000毫升₂O.

2.     底物溶液0.2 mM. 溶解12.0 mg Meo-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA. FH237).0毫升1-甲基-2-吡咯烷酮.  用Tris-NaCl缓冲液搅拌至最终体积为100毫升.

3.      弹性蛋白酶解. 溶解1.0毫克每毫升在0.05 M NaOAc pH值5含0.1 M NaCl. 准备二次稀释0.在相同的缓冲液中每毫升10毫克. 将两种溶液放在冰浴中冷藏.
 

过程

1.     将分光光度计调至410 nm，细胞温度调至25ºC.

2.     平衡3.将0 ml底物溶液放入细胞中至25ºC.

3.     添加0.01 ml弹性蛋白酶溶液(0.10 mg/ml)，混合后，每隔2-3分钟测定吸光度增加率.  增加的速度应该是线性的5到10分钟.
 

比活度计算 

Î,  1% , 280 = 6.65 mg/ml = A₂₈₀ x1.50

 Vol = 3.1毫升                = 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

单位  =  ∆A/min x 3.01 ml
mg           8.8 x 0.001 mg