HSE检测采用NS945

酶的测定方法

人痰弹性蛋白酶活性 

N-Suc-Ala-Ala-Ala-pNA底物测定(44).

所需的材料

1. Tris-NaCl buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25ºC含0.5 M NaCl和0.01%的南₃.   溶解12.70 g Tris-HCl, 2.36g Tris-base, 29.22 g NaCl和0.10克NaN₃ 900毫升H₂O.  测定pH值，必要时用0滴定.1m HCl或0.1m NaOH到pH 7.5在25ºC.  加水搅拌至1000毫升.
    
2. 底物溶液，1.0 mM. 溶解45.5 mg n - su - al - al - al - pna (EPC编号. NS945) 2.0毫升1-甲基-2-吡咯烷酮.  用Tris-NaCl缓冲液搅拌至最终体积为100毫升.
    
3. 弹性蛋白酶解. 溶解1.0毫克每毫升(0.05 M NaOAc pH值5含0.1 M NaCl). 在冰水浴中保持寒冷.

过程

1. 将分光光度计调至410 nm，细胞温度调至25ºC.
    
2. 平衡3.将0 ml底物溶液放入细胞中至25ºC.
    
3. 添加0.01毫升弹性蛋白酶溶液, 混合后，每隔2-3分钟测定吸光度增加率. 增加的速度应该是线性的5到10分钟.
    

比活度计算

Î, 1% , 280 = 6.65 mg/ml = A₂₈₀ x1.50

Vol = 3.1毫升= 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

8.pNA在410 nm处的消光系数为8 = mM

单位  =  ∆A₄₁₀ x 3.01 ml
mg          8.8 x 0.01 mg