人肺胰酶活性(83)

的决心 人肺胰酶活性(83)

n -苯甲酰- phi - val - arg - pna (EPC号. NB32)作为基板.

所需的材料

1.     Buffer; 0.1 M Tris pH 8.3在25ºC下制备. 混合0.1m Tris-HCl变成0.1 M Tris-base直到pH =
8.3在25°C.

2.     Buffer; 0.05 NaOAc pH值.0. 混合0.05 M HAc变成0.05 M NaOAc至pH = 5.0在25ºC.

3.     Substrate Solution; 1.0 mM. 通过溶解68来准备.0 mg. n -苯甲酰- phi - val - arg - pna (EPC编号.
NB32)在1毫升的1-甲基-2-吡咯烷酮. 与tris缓冲液一起调至100毫升.
 

4.     酶解. 溶解为1.0毫克每毫升在0.05 M NaOAc pH值. 保持在5°C.
 

过程

1.     将分光光度计调至410 nm，细胞温度调至25ºC.

2.     吸管2.70毫升缓冲液(pH值8.3 Tris)进入细胞. 添加0.3 ml底物溶液. 混合，平衡到
细胞内25°C.

3.     加入5μl酶液，测定与初始反应相比，每分钟吸光度的增加量.
 

比活度计算 

Vol = 3.1毫升                = 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

Î， 1毫米酪氨酸= 0.964

单位  =  (∆A_256/Min) x (3.01 ml)
mg              0.964 x 0.001 mg