人体皮肤Chymase活性

人皮肤糜酶活性的测定

n -苯甲酰- l-酪氨酸-乙酯底物测定(86)

所需的材料

1. Buffer; 0.6 M Tris-HCl pH值.0包含3.0 M NaCl在25°C. 溶解53.3克Tris-HCl, 31.8克Tris-base和175.3克氯化钠和900毫升水. 滴定至pH值8.0, 25°C，与水搅拌至1000毫升.

2. Substrate; 1.0 mM. 将31毫克n -苯甲酰- l-酪氨酸乙酯溶解在100毫升30% (v/v)乙醇中.

3. 酶解. 准备0.每毫升含1毫克.5 M NaOAc H.0. 在冰浴中保持5°C.

过程

1. 将分光光度计调至256nm，细胞温度调至25°C.

2. 吸管1.5毫升缓冲液和1.5毫升底物进入细胞. 混合，在细胞内平衡至25°C.

3. Add 10 μl enzyme solution; mix and record increase in A256 nm/min for 2-4 minutes.

比活度计算

Vol = 3.1毫升= 256海里T = 25°C光路我= 1厘米,1毫米酪氨酸= 0.964

单位  =  ∆A₂₅₆/min x (3.01 ml)
mg             0.964 x 0.001 mg