人痰溶菌酶活性测定(45)
所需的材料
1. Buffer; 0.1 M Tris pH 7.5 .在25°C制备. 溶解12.70 g Tris-HCl和2.36g Tris-base在900ml H2O中. 测定pH值，必要时用0滴定.1m HCl或0.1 M NaHO到pH值7.5在25°C. 加入水至1000毫升.
2. Substrate suspension; 0.04% w/v. 将40毫克冻干溶菌微球菌倒入200毫升锥形瓶中. 加入100毫升Tris(步骤1中制备的).)，搅拌至悬浮液均匀. 每日准备新鲜食物.
3. 酶解. 溶解1.在Tris缓冲液中为0 mg / ml. 准备二次稀释0.在缓冲液中每毫升05毫克. 将酶溶液冷藏在冰浴中.
过程
1. 平衡分光光度计至450 nm，细胞温度至25°C.
2. 分发3.在细胞中加入0 ml底物悬浮液，平衡至25°C.
3. 添加0.005毫升的0.溶菌酶溶液每毫升0.05毫克, 混合后，每隔1分钟测定吸光度下降率. 3 - 6分钟内呈线性下降.
比活度计算
Vol = 3.005 A = 450 nm T = 25°C光程= 1厘米
Î， 1%， 1厘米= 17.60 mg/ml = A280 x 0.568
单位 = ∆A / min x 1000 ml
mg 8.8 x 0.0025 mg