脂肪酶活性测定(46)
设备
1. 研究配备有银/氯化银参考电极的玻璃体组合电极的高质量可膨胀式pH计.
2. 在恒温装置内搅拌反应容器(25毫升).g.、水浴、恒温块.
3. A类微滴定管，2.00毫升含有0.01 ml细分.
试剂
所有使用无碳酸盐，所有玻璃蒸馏水，1型水
1. 橄榄油-金合欢胶乳液. 慢慢溶解.6克金合欢胶，150毫升水. 加入25毫升试剂级, 低酸度橄榄油，低速搅拌10分钟，加水搅拌至250毫升.
2. 1.5 M NaCl
3. 0.015 M CaCl2
4. 0.054 M牛磺酸钠
5. Titrant; 0.010 M NaOH，标准化
6. 0.1m NaOH
7. 酶:溶解1mg /ml于0.5 M三酸碱度8，含有5 mM脱氧胆酸钠
基质的制备，15.0 ml
按顺序5交付.0毫升橄榄油-金合欢胶乳液，4.0 ml 1.5 M NaCl, 5.0 ml 0.015 M CaCl2和1.0 ml 0.054 M CaCl2和1.0 ml 0.054 M牛磺酸钠，在反应容器中充分混合.
过程
搅拌15毫升底物25ºC±0.2ºC的脂肪酶，EPC号.L397和EPC号.HL938，和37°C±0.3ºC为脂肪酶EPC号.LC452及EPC编号.IC398. 滴定至稳定的pH值8.5和0.1m NaOH. 添加0.002 to 0.004毫克酶. 当pH值达到8时.0启动计时器，并提供滴定剂(0.0100m NaOH)从滴定管ca有出口. 搅拌反应混合物表面以下5毫米处. (从滴滴管尖端到反应混合液使用硅胶管方便.保持pH值恒定.0滴定2 ~ 4分钟，记录每分钟滴定液的样本量. 重复第15步骤中的滴定液，确定空白率.0毫升底物，不加酶. 滴定液的空白体积应小于0.在2到4分钟内注射10毫升. 记录每分钟滴定液的空白体积.
比活度计算
单位 =(样品体积-空白体积)x 0.01200 x 1000
酶