弹性蛋白酶扩散板的制备方法
该程序足以制备10个弹性蛋白酶扩散板.
所需的材料
1. 弹性荧光素或弹性罗丹明,粒径通过400目(小于37微米)
2. 琼脂,高纯度
3. 丙酮,试剂级
4. 缓冲区,0.2 M Tris pH值8.8在37ºC含0.02% NaN3
5. 10厘米²塑料一次性培养皿. 十个要求
6. 热板配有磁力搅拌器.
过程
1. 在干燥的250毫升烧瓶中,加入600毫克底物. 加入5毫升丙酮,轻轻旋转,使所有的颗粒都湿润. 加入100毫升缓冲液,旋转至所有颗粒分散. 加热并搅拌至90º-95ºC以排出丙酮. 冷却至约80ºC.|
2. 加上2.5克琼脂加热,搅拌至悬浮液沸腾. 减少热量,保持85º-95ºC的温度.
3. 不要用嘴吸. 将10毫升热悬浮液放入水平培养皿底部. 盖上盖子,冷却至室温.
4. 在凝固的凝胶上切4毫米的孔. 在凝胶表面盖上一层方形聚乙烯薄膜. 在薄膜上放一圈饱和的滤纸. 用聚乙烯袋盖住并密封. 储存2º-5ºC. 不要冻结. 稳定约4个月.